Мать Тимофея склоняла его к женитьбе, надеясь, что он займет место священника и будет опорой всему семейству. Но Тимофей избрал иной путь. 10 апреля 1758 года он был пострижен в монахи и получил новое имя — Тихон. Вскоре после рукоположения в священный сан его назначили ректором Тверской семинарии. Обладая даром слова, он так увлекательно читал лекции, что послушать его приходили не только семинаристы, но и много посторонних лиц, так что в аудитории никогда не было свободного места.
В 1761 году молодого архимандрита Тихона Синод избрал епископом. «Я никогда и не мыслил о важном сане, — вспоминал святитель, — у меня мысли были удалиться в пустынный монастырь, быть монахом и проводить уединенную жизнь. Но Богу угодно так, что я, недостойный, — епископ». Его назначают на Воронежскую кафедру. В Воронеже святитель устроил семинарию, во многих городах своей епархии открыл славянские школы при храмах и монастырях для детей всех сословий. Он лично руководил семинарией, постоянно беседовал с учениками и посещал занятия, составил особые правила для семинаристов, тратил большие средства на содержание и поощрение учащихся, приглашал преподавать лучших выпускников духовных академий, собрал образцовую библиотеку.
Много сил потратил святитель на борьбу с народными языческими празднованиями, сопровождавшимися всеобщим пьянством, развратом, массовыми кулачными боями и потасовками. Однажды в самый разгар такого праздника он явился на площадь и стал говорить с такой убежденностью, что только что бушевавшая толпа вмиг присмирела, а затем разнесла в щепки балаганы и разошлась по домам. С тех пор такие празднования в Воронеже прекратились. К святителю всегда был свободный доступ. Он никогда не отказывал в приеме и личной беседе тем, кто желал его видеть. Ночи же епископ Тихон проводил за письменным столом. Вскоре и без того слабое здоровье его заметно ухудшилось, и через пять лет управления Воронежской кафедрой он ушел на покой, поселившись в Задонском монастыре. Здесь святитель своей жизнью показал пример высокого благочестия и аскетизма и вошел в историю Православия с именем Тихона Задонского.